使用WATERS色譜柱遇到柱效低怎么辦

更新時(shí)間：2019-10-21

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　　WATERS色譜柱與其它生物分離一樣，相比基于HPLC的色譜柱，使用粒徑更小的UPLC/UHPLC色譜柱可以在更短的時(shí)間內(nèi)實(shí)現(xiàn)優(yōu)異的組分分離度。通常情況下，采用鹽濃度不斷增加的梯度進(jìn)行分離，體積較小且所帶電荷較少的肽會在較長的肽片段之前洗脫。與反相肽分離不同，洗脫液的pH會顯著影響分離，因此需要進(jìn)行方法開發(fā)以獲得滿意的色譜結(jié)果。

WATERS色譜柱采用極性基團(tuán)嵌入技術(shù)，是在通常的C18／C8鏈中引入特定的極性基團(tuán)所得到的新型固定相。大量研究表明，極性官能團(tuán)可有效阻擋有機(jī)堿與硅膠表面殘余硅羥基的不良作用，因而其峰形比相應(yīng)的C18／C8柱更優(yōu)。同時(shí)，這類固定相允許使用全水流動相而不會發(fā)生“相塌陷”現(xiàn)象，因而可用于分離許多親水性化合物。

　　使用WATERS色譜柱遇到柱效低怎么辦？

　　新柱（未進(jìn)過樣品或只進(jìn)過柱效測試標(biāo)樣）柱效低：以原廠報(bào)告的條件下測試同樣的標(biāo)樣，相比較根據(jù)儀器不同，如果250*4.6mm，5um柱效在2000左右的差異可以認(rèn)為是符合出廠要求的；如果您的儀器測試結(jié)果相差太大，可能是系統(tǒng)問題，包括接了保護(hù)柱，平衡時(shí)間不夠等引起。需取下保護(hù)柱（測試柱效時(shí)不能加保護(hù)柱），增加平衡時(shí)間，對于新柱，50mm長的柱子平衡時(shí)間在30min以上，150mm的柱子在45min以上，250mm長的柱子在75min以上。也有可能是柱子本身柱效低，寄回公司檢測，如果核實(shí)，可提供相關(guān)更換處理，

　　使用一段時(shí)間后的舊柱柱效降低：排除系統(tǒng)原因，基本是測試的條件和樣品導(dǎo)致，如測試條件的pH值在柱子耐受pH值范圍以外，導(dǎo)致柱子內(nèi)填料的溶解或鍵和相流失，此外，樣品前處理不好也會使柱子很快損壞。

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